豬藍耳病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書

Service manual of ELISA Kit for PRRS Virus antibody

【產品簡介】豬藍耳病（PRRS）是一種高致病率、高死亡率的病毒病，給國內養豬業造成巨大的損失。在免疫預防工作中，接種了疫苗后，由于多種因素可能導致豬不產生或產生低水平藍耳病病毒抗體。

本試劑盒采用酶聯免疫吸附試驗檢測豬血清中PRRSV抗體，用于免疫疫苗后抗體動態水平監測，指導免疫預防工作，評估豬場藍耳病免疫狀況，也可用于藍耳病的流行病學調查。

【豬藍耳病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書產品內容】

【成分性狀】

【用法與判定】 按以下步驟進行：

1、需要自備的器材

1.1 微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標儀；

1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備

用樣品稀釋液將待檢血清樣品進行50倍稀釋(建議：4μl血清樣品加入196μl樣品稀釋液中)，樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應無溶血現象發生；②不能稀釋陰性、陽性對照。

3、操作步驟 （﹡使用前應輕輕旋轉或震蕩予以混勻，所有試劑應恢復至室溫）

3.1 在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照；

3.2 在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照；

3.3  取100μl稀釋好的待檢樣品加入相應孔中，并做好記錄；

3.4 37℃孵育30min；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結晶，需先溶解后，方可進行稀釋）進行洗板，重復5次，每次30s；

﹡加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結果，盡量將孔內洗滌液拋甩干凈；

3.6 每孔加100μl酶標結合物；

3.7  37℃孵育30min；重復步驟3.5；

3.8 每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；

3.10  每孔加50μl的終止液；

3.11  立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、試驗有效性判斷

4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD₄₅₀值≤0.3；

4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD₄₅₀值≥0.6；

4.3臨界值(C.O.)計算：臨界值=0.18+陰性對照均值；陰性對照OD₄₅₀值大于0.3時應舍棄，如所有陰性對照OD₄₅₀值均大于0.3時須重復實驗；陰性對照低于0.05時以0.05計算。

4.4結果判定： 檢測樣品OD₄₅₀值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性； 檢測樣品OD₄₅₀值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。

【注意事項】

（1）待檢血清樣品數量過多時，應先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統一將血清樣品加入酶標板中，使反應時間一致。

（2）試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。

（3）底物液和終止液對皮膚有刺激性，注意防護。

（4）底物液不要暴露于強光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。

（5）所有試劑應在2～8℃存放；使用前恢復到室溫，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止試劑盒組分受到污染。

（7）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

（8）操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。

【規格與包裝】96T×2

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為12個月

僅供獸醫診斷使用

長期提供原核、真核蛋白表達構建服務

長期 提供抗原偶聯、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯標記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務