犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA試劑盒使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Hydatid（ Hyd） coproantigens Test Kit for Canine.

【用途】 本試劑盒采用夾心ELISA方法定性檢測(cè)犬糞細(xì)粒棘球絳蟲抗原。

【規(guī)格】 96T/盒

【儲(chǔ)藏與有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

【試劑盒組成】

【犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原ELISA試劑盒使用說明書溶液配制】

1. 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將洗滌液 10×按 1:9 稀釋，充分混勻即為工作濃度洗滌液。

2. 樣品稀釋液配制：用蒸餾水或去離子水將樣品稀釋液 2×按1:1 稀釋（如取100mL 濃縮樣品稀釋液加 100mL 蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作濃度樣品稀釋液。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(25℃左右)，以免溫度過低影響抗原抗體反應(yīng)。

【樣品要求】
1. 本試劑適用于檢測(cè)犬糞樣品；
2. 應(yīng)采集新鮮的犬糞樣品進(jìn)行測(cè)試。若不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)將糞樣低溫凍存，防止反復(fù)凍融。如犬糞難以溶解，應(yīng)適當(dāng)搗碎處理。

【操作步驟】

1. 樣品處理：犬糞樣品需要預(yù)先低溫（ -70℃以下） 冷凍 7 天以上，以滅活蟲卵。稱取 1克犬糞,加入1mL樣品稀釋液，充分?jǐn)嚢杌靹颍o置10分鐘，再3000rpm離心10分鐘，取上清液待檢。
2. 加樣反應(yīng)：樣品孔，每孔僅加入100μL待檢樣品；陰性對(duì)照2孔，每孔僅加入100μL陰性對(duì)照品；陽(yáng)性對(duì)照 2 孔，每孔僅加入 100μL 陽(yáng)性對(duì)照品。蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30分鐘。

3. 洗板：甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗板3 次，每次均需靜置1分鐘；最后一次甩凈，拍干。

4. 加酶反應(yīng)：每孔加酶結(jié)合物100μL，蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗板，拍干。

5. 顯色反應(yīng)：按所需用量，臨用前取等體積底物液和顯色液充分混勻后每孔加100μL，蓋好封板膜，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

6. 終止反應(yīng)：加終止液50μL，用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)（630nm作為參比波長(zhǎng)）讀取OD值。

【結(jié)果判定】

1. Cut-off 值（COV）=陰性對(duì)照平均OD值×2.1（陰性對(duì)照孔OD 值＜0.15 時(shí)按0.15計(jì)）。
2. 有效性判定：
陰性對(duì)照孔 OD 值≤0.30（ 若大于 0.30 則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）；
陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 值≥0.50（ 若小于 0.50 則實(shí)驗(yàn)無(wú)效）。

【判定標(biāo)準(zhǔn)】

樣品 OD 值≥COV， 判為犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原陽(yáng)性；
樣品 OD 值＜COV， 判為犬細(xì)粒棘球絳蟲抗原陰性。

【檢驗(yàn)方法的局限性】本試劑盒僅供篩查，不作為確診依據(jù)。

【注意事項(xiàng)】

1. 所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(25℃左右)，以免溫度過低影響抗原抗體反應(yīng)。

2. 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用溫度計(jì)檢查溫箱溫度，溫度過高或過低影響OD值高低。

3. 包被板反應(yīng)時(shí)嚴(yán)禁堆疊放置，應(yīng)該平鋪且板間有空隙，不要離溫箱壁太近。

4. 實(shí)驗(yàn)所用移液器及設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)。

5. 底物液和終止液對(duì)皮膚有刺激性，請(qǐng)帶手套注意個(gè)人防護(hù)。

長(zhǎng)期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長(zhǎng)期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)