細(xì)胞RNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用專用裂解液CP在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞的裂解、提取和純化。無(wú)需使用蛋白酶K、無(wú)需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整，從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液CPW中加入48mL無(wú)水乙醇，并標(biāo)記“√"和時(shí)間，避免重復(fù)加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、1.5mL無(wú)RNase離心管、DNase I（2U/μL，或貨號(hào)QR0102）

使用方法

1. 樣本準(zhǔn)備

1.1 懸浮細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

或貼壁細(xì)胞用yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液CP。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液CP。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

1.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.5 加入0.5倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

2. RNA純化

2.1全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CPW，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.3 重復(fù)步驟2.2一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將RNA吸附柱放入新1.5mL無(wú)RNase離心管中，加入30-50μL洗脫液C，室溫放置1分鐘。

2.7 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止RNA降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。

3. 使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液CP置于65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求，請(qǐng)使用DNase I（貨號(hào)QR0102）進(jìn)行基因組清除。

常見(jiàn)問(wèn)題解析